ObjetivosDescrever achados ultra-estruturais do intestino delgado de crianças infectadas pelo HIV.MétodosEstudo descritivo, observacional de biopsias do intestino delgado, realizada entre agosto de 1994 e maio de 1995 em São Paulo - Brasil. Este material pertencia a 11 crianças infectadas pelo HIV e foi armazenado em um laboratório em blocos de parafina. As amostras de intestino delgado foram analisadas por microscopia eletrônica de transmissão e de varredura e achados os achados ultra-estruturais foram descritos por meio da análise de fotos digitalizadas desse material. Foi obtida aprovação pelo Comitê de Ética.ResultadosNa maioria das amostras a microscopia de varredura mostrou vários graus de encurtamento e diminuição do número das microvilosidades e até o completo apagamento dessas estruturas em algumas áreas. O desarranjo dos enterócitos foi visto com freqüência e, por vezes, os limites celulares estavam imprecisos. Em algumas áreas uma membrana fibrino-mucosa com espessura e extensão variáveis aparentava revestir parcial ou totalmente a superfície epitelial. Gotas de gordura no lúmen intestinal estavam presentes em várias amostras e bactérias morfologicamente semelhantes a bacilos foram observadas em duas amostras. A microscopia eletrônica de varredura confirmou as observações constatadas nas microvilosidades através da microscopia de transmissão e também mostrou pequenos “tufos” dessas estruturas. Além disso, mostrou aumento do número de vacúolos e de formações multivesiculares dentro de vários enterócitos, aumento da presença de linfócitos intraepiteliais, vacuolização mitocondrial e alargamento da membrana basal na maioria das amostras analisadas. No entanto, algumas amostras apresentavam-se com aspecto normal.ConclusõesNosso estudo mostrou a ocorrência comum de várias alterações ultra-estruturais intestinais importantes e de intensidade variável entre crianças infectadas pelo HIV, algumas delas, ao nosso conhecimento, não descritas anteriormente.

ObjectivesTo describe HIV children's small intestinal ultrastructural findings.MethodsDescriptive, observational study of small intestine biopsies performed between August 1994 and May 1995 at São Paulo, SP, Brazil. This material pertained to 11 HIV infected children and was stored in a laboratory in paraffin blocks. Scanning and transmission electronic microscopy were used to view those intestine samples and ultrastructural findings were described by analyzing digitalized photos of this material. Ethical Committee approval was obtained.ResultsIn most samples scanning microscopy showed various degrees of shortening and decreasing number of microvilli and also completes effacements in some areas. Derangement of the enterocytes was seen frequently and sometimes cells well defined borders limits seemed to be loosened. In some areas a mucous-fibrin like membrane with variable thickness and extension appeared to partially or totally coat the epithelial surface. Fat drops were present in the intestinal lumen in various samples and a bacterium morphologically resembling bacilli was seen in two occasions. Scanning microscopy confirmed transmission microscopy microvilli findings and also showed little “tufts” of those structures. In addition, it showed an increased number of vacuoles and multivesicular bodies inside various enterocytes, an increased presence of intraepithelial lymphocytes, mitochondrial vacuolization and basement membrane enlargement in the majority of samples analyzed. However, some samples exhibited normal aspect.ConclusionsOur study showed the common occurrence of various important intestinal ultrastructural alterations with variable degrees among HIV infected children, some of them in our knowledge not described before.

OBJETIVO: Avaliar interações de amostras de Escherichia coli enteroagregativa com tecido intestinal humano, a fim de documentar potenciais alterações em diferentes regiões do trato digestivo. MÉTODOS: Amostras de Escherichia coli enteroagregativa isoladas das fezes de crianças com diarreia persistente e a amostra protótipo 042, isolada de uma criança com diarreia em Lima, no Peru (controle positivo), foram analisadas por microscopia óptica de luz após semeadura em cultura de orgão in vitro de fragmentos de mucosa ileal e colônica. Foram analisadas as interações entre as diferentes cepas de Escherichia coli enteroagregativa e as mucosas ileal e colônica. RESULTADOS: A análise por microscopia óptica de luz indicou associação destes micro-organismos com o epitélio, provocando alterações. As cepas estudadas aderiram a ambas as regiões avaliadas (intestino delgado distal e grosso) e causaram alterações, especialmente naquelas áreas onde interagiram diretamente com o epitélio. No íleo, algumas regiões mostraram internalização secundária. CONCLUSÕES: Esses agentes podem causar diarreia persistente por meio de alterações no intestino delgado, no qual ocorrem as funções digestivo-absortivas. As lesões inflamatórias descritas na mucosa colônica poderiam explicar a colite mostrada em algumas crianças infectadas por Escherichia coli enteroagregativa.

OBJECTIVE: To examine the interactions of Enteroaggregative Escherichia coli strains with small and large intestinal mucosa, in order to detect potential alterations in both regions of the digestive tract. METHODS: Enteroaggregative Escherichia coli strains, isolated from stools of infants with persistent diarrhea and the prototype strain 042 (O44:H18), isolated from a child with diarrhea in Lima, Peru (positive control), were analised by light microscopy after in vitro organ culture assay of ileal and colonic mucosa. The interactions between the different enteroaggregative Escherichia coli strains and the ileal and colonic mucosa were analysed. RESULTS: Light microscopy analysis suggested an association of enteroaggregative Escherichia coli strains with the epithelium, inducing alterations. These bacteria adhered to both small and large bowel mucosa. The enteroaggregative Escherichia coli strains induced alterations in those areas where they were directly interacting with the epithelium. In the ileum, some areas showed a secondary internalization. CONCLUSIONS: The enteroaggregative Escherichia coli strains could cause persistent diarrhea inducing alterations in the small intestinal structures, where the digestive-absorptive functions take place. Inflammatory lesions observed in colons could justify the colitis described in some children infected by enteroaggregative Escherichia coli.

OBJETIVO: Evaluar interacciones de muestras de Escherichia coli enteroagregativa (EAEC) con tejido intestinal humano, a fin de documentar potenciales alteraciones en distintas regiones del tracto digestivo (intestino delgado distal e intestino grueso) y definir, con eso, su rol en la persistencia del proceso diarreico. MÉTODOS: Muestras de EAEC aislada de las heces de niños con diarrea persistente y la muestra prototipo 042, aislada de un niño con diarrea en Lima, Perú (control positivo) fueron analizadas por microscopía óptica de luz (ML) después de siembra en cultura de órgano in vitro de fragmentos de mucosa ileal y del colon. Fueron analizadas las interacciones entra las distintas cepas de EAEC y las mucosas ileal y del colon. RESULTADOS: El análisis por ML indicó asociación de estos microorganismos con el epitelio, provocando alteraciones. Las cepas estudiadas adhirieron a ambas regiones evaluadas: intestino delgado distal y grueso y causaron alteraciones, especialmente en aquellas áreas donde interactuaron directamente con el epitelio. En el íleo, algunas regiones mostraron internalización secundaria. CONCLUSIÓN: Estos agentes pueden causar diarrea persistente mediante alteraciones en el intestino delgado, donde ocurren las funciones digestivo-absortibas. Las lesiones inflamatorias descritas en la mucosa del colon podrían explicar la colitis descrita en algunos niños infectados por EAEC.

OBJETIVO: Avaliar a eficácia da liofilização da membrana amniótica (MA) para a reconstrução da superfície ocular em coelhos. MÉTODOS: A liofilização é processo de preservação que mantém a MA estável durante longo tempo mesmo em temperatura ambiente. A córnea de um olho de cada coelho macho da raça Nova Zelândia foi marcada e desepitelizada. Essa área desepitelizada foi coberta com: Grupo 1: MA criopreservada (n=6); Grupo 2: MA liofilizada (n=6) e Grupo 3: Não coberta (n=3). A MA nos grupos 1 e 2 e a periferia da córnea no grupo 3 foram suturadas com nylon 10-0. A avaliação clínica foi realizada por um observador cego em relação à hiperemia, neovascularização e edema de córnea e reepitelização nos dia 1, 7 e 30 pós-operatórios. Após o dia 30 os ratos foram eutanizados e suas córneas enviadas para análise histopatológica e ultra-estrutural. RESULTADOS: Dois olhos no grupo 2 foram excluídos da análise devido à infecção. Não foi encontrada diferença estatisticamente significante entre os grupos em relação à avaliação clínica. Na microscopia eletrônica de transmissão, a membrana basal nos grupos de MA liofilizada e controle foi mais contínua e homogênea em relação ao grupo da MA criopreservada. CONCLUSÕES: O processo de liofilização parece ser boa opção para a preservação da membrana amniótica humana para utilização na reconstrução da superfície ocular.

PURPOSE: To determine the efficacy of freeze-dried amniotic membrane (AM) for reconstruction of the ocular surface in rabbit eyes. METHODS: The sterilized, freeze-dried amniotic membrane (lyophilized or FD-AM) is a preservative method that uses the drying by freezing process to maintain the AM well preserved for a long time even at room temperature. This paper is an experimental animal interventional study. One eye of each of 15 male New Zealand rabbits (1.5 - 3.0 kg) had the central cornea marked with a 6.0 mm trephine. The marked area was deepithelialized with a No.15 blade. The denuded corneal surface was covered as follows: Group 1: cryopreserved AM (n=6); Group 2: freeze-dried AM (n=6); and Group 3: not covered (control group, n=3). The AM in group 1 and 2 and the periphery of the denuded area in group 3 were secured with continuous 10-0 nylon sutures. The clinical evaluation was made by a blinded observer and graded on a four-point scale (1= minimal, 4= marked) for conjunctival and ciliary hyperemia, eyelid edema, corneal neovascularization, corneal opacity and reepithelialization on postoperative (PO) days 1, 7 and 30 . After PO day 30, the rabbits were euthanized and their corneas were sent for histopathological and ultrastructural analysis to evaluate tissue inflammation, reepithelialization, and basement membrane integrity. RESULTS: Two eyes in group 2 had a corneal infection and were excluded from the analysis. No statistically significant differences among the three groups were found (p>0.05) regarding the clinical evaluation on 1st, 7th and 30th PO days. On transmission electron microscopy, the basement membrane in lyophilized and control groups was more continuous and homogeneous than in the glycerol group. CONCLUSIONS: The freeze-drying method seems to be a good option to preserve human amniotic membrane to be used in ocular surface reconstruction. This preservative method reduces the preservation costs and may enhance the use of AM, facilitating its storage and transport.

OBJETIVO: Avaliar as características morfológicas da membrana amniótica desepitelizada por diferentes técnicas. MÉTODOS: A membrana amniótica humana foi coletada no momento do parto, fixada em concentrações crescentes de glicerol (0-50% em DMEM) e preservada a 80°C até a hora de ser usada. O estudo consistiu de 4 grupos: epitélio intacto (controle) e membranas desepitelizadas pela tripsina (2 mg/mL a 1:250), dispase (1,2 U/mL em solução salina balanceada de Hank livre de Mg2+ e Ca2+) e ácido etilenodiaminotetra-acético (EDTA), 0,02%). As amostras foram submetidas à análise por microscopia eletrônica (de varredura e de transmissão). RESULTADOS: A microscopia eletrônica de varredura mostrou epitélio intacto no grupo controle e sua ausência nas membranas amnióticas desepitelizadas pela tripsina e pela dispase. Naquelas tratadas com o ácido etilenodiaminotetra-acético, havia áreas com e sem epitélio. Quando avaliadas pela microscopia eletrônica de transmissão, o epitélio estava intacto e firmemente aderido à membrana basal através de hemidesmossomos nos grupos controle e em parte do ácido etilenodiaminotetra-acético. Havia apenas fibras colágenas nas membranas tratadas com dispase e tripsina. CONCLUSÕES: O tratamento da membrana amniótica com tripsina e dispase pode causar completa retirada do epitélio e da membrana basal, ao passo que o ácido etileno- diaminotetra-acético pode preservar áreas com epitélio intacto e parcialmente destruir a membrana basal em outras.

PURPOSE: To evaluate the morphological features of the amniotic membrane denuded by different techniques. METHODS: Human amniotic membrane was collected at the time of delivery, fixed in increasing concentrations of glycerol (0-50% in DMEM) and preserved at -80ºC until the time of use. The study consisted of 4 groups: intact epithelium (control) and denuded by trypsin (2 mg/mL at 1:250), dispase (1.2 U/mL in Mg2+ and Ca2+ free Hank's balanced salt solution) or ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 0.02%. Specimens were submitted to electron (scanning and transmission) microscopy analysis. RESULTS: Scanning electron microscopy disclosed intact epithelium in the control group and its absence in the amniotic membranes denuded by trypsin and dispase. In those denuded by ethylenediaminetetraacetic acid there were areas with and without epithelium. When assessed by transmission electron microscopy, the epithelium was intact and firmly adhered to the basement membrane by hemidesmossomes in controls and in parts of ethylenediaminetetraacetic acid group. There were only collagen fibers in the dispase- and trypsin-treated groups. CONCLUSIONS: Trypsin and dispase treatment of the amniotic membrane may cause complete denuding of the epithelium and basement membrane whereas ethylenediaminetetraacetic acid may leave some intact epithelium-areas and partially destroy the basement membrane in others.